RESUMO: Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.

ABSTRACT: Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig’s intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.

RESUMO: A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).

ABSTRACT: Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.

RESUMO: A bactéria Pasteurella multocida é causa frequente do Complexo de Doenças Respiratórias dos suínos em animais de terminação. Historicamente, a bactéria é reconhecida como agente oportunista, causando pneumonia bacteriana secundária. Diversos relatos brasileiros sugerem a habilidade da P. multocida de causar infecção pulmonar primária que leva a mortalidade de animais de terminação antes do abate. O objetivo deste estudo foi avaliar achados anatomopatológicos pulmonares associados com infecção por P. multocida, obtidas de animais acometidos clinicamente por doença respiratória e de animais ao abate. Avaliou-se 25 amostras de pulmão de 14 rebanhos obtidas de animais de terminação com sinais clínicos de doença respiratória aguda, e 19 pulmões coletados ao abate de 14 rebanhos diferentes. Em todos os pulmões, realizou-se isolamento bacteriano, e apenas amostras com crescimento puro de P. multocida foram incluídas no trabalho. Avaliou-se as lesões macro e microscopicamente, assim como co-infecções por Influenza A, Circovirus suíno tipo 2 (PCV2) e Mycoplasma hyopneumoniae. Pleurite e pericardite foram mais frequentemente observadas em amostras clinicas (P<0,05). Ainda, houve tendência numérica indicando a ocorrência de linfadenomegalia e exsudação cavitária, mais presentes em amostras clínicas. Treze amostras de pulmão foram negativas para M. hyopneumoniae, Influenza A e PCV2 por imunoistoquímica (IHQ), com identificação de apenas P. multocida. Nestes casos, lesões macroscópicas como pleurite, pericardite e linfadenomegalia foram sempre presentes, sem lesões histológicas indicativas de outros agentes como Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis ou Haemophilus parasuis. Estes achados sugerem a habilidade de alguns isolados de P. multocida de causarem quadro respiratório primário e infecção sistêmica. No entanto, neste estudo, não foi possível determinar marcadores de virulência específicos para justificar tais achados.

ABSTRACT: The bacterium Pasteurella multocida is a frequent cause of porcine respiratory disease complex in finishing pigs. Historically, the bacterium is recognized as an opportunistic agent, causing secondary bacterial pneumonia in pigs. Several Brazilian reports have suggested the ability of P. multocida to cause primary pulmonary infection that leads to the death of finishing pigs prior to slaughter. The aim of this study was to evaluate anatomopathological pulmonary findings associated with P. multocida infection that were obtained from animals with clinical respiratory disease and from animals at slaughter. Twenty-five lung samples from 14 herds of finishing pigs with acute clinical respiratory disease and 19 lungs collected at slaughter from a different set of 14 herds were studied. In all lung samples, bacterial isolation was performed, and only samples with pure P. multocida growth were included in the study. Gross and histopathological lesions were evaluated, as well as Influenza A, porcine circovirus type 2 (PCV2) and Mycoplasma hyopneumoniae co-infections. Pleuritis and pericarditis were more often observed in clinical samples (P<0.05). Moreover, there was a numerical trend indicating that pericarditis, lymphadenomegaly and cavity exudates were more often present in clinical samples. Thirteen lung samples were negative to M. hyopneumoniae, Influenza A and PCV2 by immunohistochemistry (IHC), with only P. multocida identified. In these cases, gross lesions such as pleuritis, pericarditis and lymphadenomegaly were always present, and no histologic lesions indicative of other agents such as Actinobacillus pleuropneumoniae, Actinobacillus suis or Haemophilus parasuis were observed. These findings suggest the ability of some P. multocida isolates to cause primary respiratory and systemic infection. However, in this study, it was not possible to determine specific virulence markers to explain these findings.